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汉恒生物科技（上海）有限公司怎么样？

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一篇8分的circRNA做了哪些内容？

backsplicejunction位点一端互补配对，本文带大家一起探讨circRNA功能验证策略：对3freeRNA以及genomeDNA同时进行PCR扩增，而探针序列设计是验证成功至关重要的环节，也可针对内含子区域序列设计siRNA.DNAfree，建议探针尽可能跨backsplice

如何用RNA干扰小鼠基因？

020答：

【这个问题本人不是很专业，部分资料来源网络，在此对原作者致谢！！！】

构建一个shRNA表达载体，将此载体用电穿孔的方法注射入小鼠胚胎干细胞，shRNA在小鼠内发挥作用，沉默目的基因。

什么是RNA干扰？

RNA干扰（RNA interference,RNAi），又称转录后基因沉默，是指将特异性同源双链RNA导入到细胞内，使目的基因的不表达或表达水平下降。

什么是shRAN？

shRNA"是short hairpin RNA的缩写，即，"短发夹RNA"。shRNA 包括两个短反向互补序列，中间由一顶端环（loop)序列分隔的，组成发夹结构，通常由细胞内源的RNA聚合酶III (RNA polymerase III)启动子控制转录，shRNA序列的末端连接 5-6个T作为RNA聚合酶III的转录终止子。shRNA也可以由其它RNA聚合酶的启动子转录产生。

各名词的介绍：

miRNA：（microRNA)是一类由内源基因编码的长度约20-24个核苷酸的非编码单链RNA分子，在动植物中参与对大量基因的表达调控。到目前为止，在动植物以及病毒中已经发现四千多种miRNA分子。大多数miRNA基因以单拷贝、多拷贝或基因簇（cluster)的形式存在于基因组中。每种miRNA可以调控多个靶基因，而几种miRNA 也可以共同参与调节同一基因，组成复杂的调节网络。据推测，miRNA调节着人类一半以上基因的表达。miRNA存在多种形式，最原始的是pri-miRNA ;pri-miRNA经过Drosha加工后，成为pre-miRNA，即miRNA前体，长度大约为50-90个核苷酸；pre-miRNA再经过Dicer酶酶切后，成为长约20-24个核苷酸的成熟miRNA。miRNA主要通过抑制翻译和加速mRNA的脱腺苷酸化抑制靶基因表达，其机制有别于siRNA介导的mRNA降解。
siRNA：(Small interfering RNA, siRNA)是指一种小 RNA 分子 (约21-25个核苷酸），可由Dicer (RNA酶III家族中对双链RNA具有特异性的酶）从其前体 (比如dsRNA、shRNA等）加工而成，也可由化学方法合成或由其它蛋白加工产生。siRNA是 siRISC的主要成员，激发与之序列互补的目标RNA被迅速切割降解，导致目标基因的沉默，因此成为RNAi中的关键功能分子。
RNAi：（RNA interference, RNA干扰）是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA(dsRNA)诱发的、高效特异性降解具有互补配对序列的RNA的现象。由于使用RNAi技术可以特异性关闭特定基因的表达，所以该技术已被广泛用于探索基因功能和传染性疾病及肿瘤的基因治疗等领域。dsRNA介导的RNAi现象在真菌、果蝇、拟南芥、锥虫、水螅、涡虫、斑马鱼等多种真核生物中均有发现，而且在植物中的转录后基因沉默(posttranscriptional gene silencing，PTGS)、共抑制（cosuppression)及 RNA 介导的病毒抗性、真菌的抑制（quelling)现象也均属于RNAi在不同物种的表现形式。

如何产生小干扰RNA？

在活体中产生"小干扰RNA"(siRNA)的一种办法是，将siRNA序列作为"短发夹"的一部分克隆进质粒载体中。当送入动物体内时，该发夹序列被表达出来，形成一个带有顶端环结构的"双链RNA"（shRNA)，被细胞内的Dicer蛋白所识别和加工，产生有功能的siRNA。

shRNA的作用：

shRNA可以显著增强Dicer依赖型的siRNA 表达前体一shRNA对靶基因的抑制效率，具有表达效果更强、抑制效率更高等优点。使用的shRNA载体的现有缺点：

效率不高。往往需要设计多个shRNA才能保证有1-2个shRNA能对靶基因达到70% 以上的抑制效果。
脱革G作用（off-target)。siRNA通过与mRNA部分互补配对，以类似 miRNA的作用方式非特异性抑制靶基因以外其它基因的表达。您的关注是我继续创作的动力！欢迎：———【关注】————评论-—-——或点赞———

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